1. 加水玄學(xué)  

   實(shí)驗(yàn)室祖?zhèn)饕?guī)矩：只加蒸餾水！ 自來水的水垢能讓滅菌鍋折壽三年，老師罵人超兇。  

   水位加到“安全線”就停手，多了會(huì)噴蒸汽，少了會(huì)干燒——?jiǎng)e問為什么懂，都是教訓(xùn)。  

2. 包裝禁忌  

   培養(yǎng)基試管：蓋子擰松1/4圈！不然滅菌時(shí)氣壓差能給你表演“試管炸裂煙花秀”。  

   移液槍頭盒：用錫箔紙包好再滅菌，否則塑料盒變形直接報(bào)廢（別心疼，哭過）。  

   液體滅菌：瓶口封透氣膜！沒膜？用牛皮紙+橡皮筋捆扎，別用Parafilm密封（會(huì)炸瓶?。?。  

3. 擺鍋秘訣  

   液體放下層，固體堆上層——否則上層冷凝水下流，你的固體培養(yǎng)基秒變“水簾洞”。  

   別塞滿！ 留1/3空間給蒸汽流動(dòng)，否則角落里的物品可能滅菌失敗長(zhǎng)雜菌（別賭運(yùn)氣）。  

 【滅菌中：手別抖，穩(wěn)?。　? 

1. 參數(shù)選擇  

   常規(guī)操作：121℃×20分鐘（培養(yǎng)基、器械、槍頭）。  

   含糖培養(yǎng)基：115℃×20分鐘！高溫會(huì)讓糖焦化變褐（別讓培養(yǎng)基看起來像奶茶）。  

   滅菌袋上的化學(xué)指示條變黑才算成功，沒變色？重滅！ 否則雜菌party歡迎你。  

2. 排冷空氣  

   手動(dòng)滅菌鍋：先開排氣閥，等噴出持續(xù)蒸汽再關(guān)閥（冷空氣排不凈，溫度上不去）。  

   自動(dòng)滅菌鍋：選“液體模式”會(huì)幫你慢排氣，固體模式直接排氣可能讓液體沸騰（別手賤選錯(cuò)）。  

3. 保命操作  

   戴雙層手套！取滅菌鍋時(shí)外層手套沾水導(dǎo)熱超快，別等手燙出水泡才后悔。  

   滅菌時(shí)遠(yuǎn)離鍋體正面，蒸汽噴出能燙熟豬皮（別問我怎么知道的）。  

 【滅菌后：防翻車終極奧義】  

1. 開門時(shí)機(jī)  

   壓力表歸零后，再等10分鐘！ 80℃開鍋可能導(dǎo)致玻璃瓶炸裂（別貪快，安全第一）。  

   液體培養(yǎng)基：靜置過夜再搖動(dòng)，否則沉淀物混勻后可能凝固不徹底（別讓培養(yǎng)基結(jié)塊）。  

2. 存儲(chǔ)騷操作  

   滅菌后的培養(yǎng)基：趁熱倒平板？No！ 等冷卻到50℃再倒，否則冷凝水多到能養(yǎng)魚。  

   槍頭/器械：滅菌后烘干再密封，潮濕環(huán)境下容易長(zhǎng)霉菌（別讓耗材變成霉菌培養(yǎng)基地）。  

3. 翻車自查  

   滅菌后培養(yǎng)基渾濁？→ 可能滅菌不徹底或你忘記擰松試管蓋（常見作死行為）。  

   固體培養(yǎng)基不凝固？→ 可能滅菌時(shí)高溫破壞瓊脂（改用115℃滅菌試試）。  

翻車案例  

案例1：某同學(xué)用密封罐滅玻璃珠，開鍋時(shí)“嘭”一聲，珠子射穿天花板（實(shí)驗(yàn)室至今有彈孔）。  

案例2：滅完液體忘記關(guān)火，鍋底水燒干，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室彌漫烤鐵板味（維修費(fèi)扣光補(bǔ)助金）。  

記住：滅菌不規(guī)范，菌菌兩行淚！

????微藻培養(yǎng)基是供微藻生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。

????由于微藻具有不同的營(yíng)養(yǎng)類型，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營(yíng)養(yǎng)角度分析，微藻培養(yǎng)基中一般含有微藻所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等。

????另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達(dá)到特定要求的研究，需要進(jìn)行培養(yǎng)基配制和滅菌。

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微藻培養(yǎng)基該如何配制與滅菌?

1.配制溶液

??液體培養(yǎng)基：向容器內(nèi)加入所需水量的一部分,按照培養(yǎng)基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解。最后補(bǔ)足所需水分，對(duì)蛋白胨、肉膏等物質(zhì),需加熱溶解,加熱過程所蒸發(fā)的水分,應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。

????固體培養(yǎng)基：配制時(shí),先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續(xù)加熱至完全融化.并不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。

2.調(diào)節(jié)pH值

??用pH試紙(或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì))測(cè)試培養(yǎng)基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié),直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。

3.過濾

??用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾.

??用紗布過濾時(shí),最好折疊成六層；用濾紙過濾時(shí),可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏斗上過濾。

4.分裝

??已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝.

??斜面培養(yǎng)基：須將培養(yǎng)基分裝于試管中.一般用每只15×150毫米的試管,約裝3～4毫升(1/4～1/3試管高度).

??平板培養(yǎng)基/液體、半固體培養(yǎng)基:則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí),一手捏松彈簧夾,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養(yǎng)基。分裝時(shí),注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌污染。裝入試管的培養(yǎng)基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定.

??深層培養(yǎng)基:用20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,一般以其容積的一半為宜。

5.加棉塞

??分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免污染.棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。

??制作棉塞時(shí),要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時(shí)左手食指與姆指稍稍緊握,就會(huì)形成1個(gè)長(zhǎng)棒形的棉塞.

??棉塞作成后,應(yīng)迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應(yīng)緊貼內(nèi)壁不留縫隙,以防空氣中微藻沿皺折侵入。棉塞不要過緊過松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶?jī)?nèi),上端露出少許棉花便于拔取。

??塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札,準(zhǔn)備滅菌。

?6.制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基

?培養(yǎng)滅菌后,如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。

??制作斜面培養(yǎng)基：在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5～1米左右的木條,厚度為1厘米左右，將試管頭部枕在木條上,使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜,凝固后即成斜面培養(yǎng)基。

??制作平板培養(yǎng)基：將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,點(diǎn)燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養(yǎng)皿蓋,右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度.鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右,待培養(yǎng)基凝固后,再5個(gè)培養(yǎng)皿一疊,倒置,平放于恒溫箱內(nèi),24小時(shí)后檢查,如培養(yǎng)基末出現(xiàn)異?，F(xiàn)象，即可用來培養(yǎng)微藻。

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