一、為什么需要分階段擴(kuò)培？

小球藻的擴(kuò)培需循序漸進(jìn)，分一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)逐級(jí)放大。原因在于：

1. 降低污染風(fēng)險(xiǎn)：直接大規(guī)模培養(yǎng)易受雜菌污染，分階段可逐步控制環(huán)境。

2. 優(yōu)化生長(zhǎng)條件：不同階段的光照、通氣和營(yíng)養(yǎng)需求不同，需針對(duì)性調(diào)整。

3. 提高成功率：逐級(jí)擴(kuò)培能保證藻種活力，避免資源浪費(fèi)。

 二、培養(yǎng)前的通用準(zhǔn)備

 培養(yǎng)基選擇：推薦使用BG11培養(yǎng)基（含硝酸鹽、磷酸鹽、微量元素等），按配方配制后需高溫滅菌（121℃滅菌20分鐘）。

 藻種來(lái)源：選擇活性高、無(wú)污染的藻種，可從專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)購(gòu)買(mǎi)或自行保存。

 基礎(chǔ)設(shè)備：光照培養(yǎng)箱、通氣泵、pH計(jì)、顯微鏡、滅菌鍋等。

 三、分階段擴(kuò)培操作詳解

 1. 一級(jí)擴(kuò)培（實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模培養(yǎng)）

目標(biāo)：激活藻種，獲得高純度基礎(chǔ)藻液。  

步驟：  

1. 接種：在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，將藻種按20%比例接種到滅菌后的BG11培養(yǎng)基中（例如：100ml培養(yǎng)基加入20ml藻種）。  

2. 培養(yǎng)條件：  

    光照：2000-5000 lux（相當(dāng)于日光燈下15-30cm距離），每日12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗。  

    溫度：25-30℃，避免劇烈波動(dòng)。  

    通氣：輕微通氣（每秒12個(gè)氣泡）或每日手動(dòng)搖瓶3-4次。  

3. 監(jiān)測(cè)與收獲：  

    每天觀察藻液顏色，正常應(yīng)為鮮綠色；若發(fā)黃或渾濁，可能被污染。  

    3-5天后用顯微鏡檢查細(xì)胞密度，當(dāng)藻液濃度達(dá)到5*10^6 cells/mL時(shí)，可轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：  

 嚴(yán)格無(wú)菌操作，接種時(shí)佩戴口罩和手套。  

 定期測(cè)pH值，用稀鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)至7.0-8.5。

 2. 二級(jí)擴(kuò)培（中規(guī)模培養(yǎng)）

目標(biāo)：擴(kuò)大藻液體積，為規(guī)?；a(chǎn)做準(zhǔn)備。  

步驟：  

1. 接種：將一級(jí)藻液按10-20%比例接入更大的培養(yǎng)容器（如5L玻璃罐）。  

2. 培養(yǎng)條件：  

    光照：5000-10000 lux（需補(bǔ)光燈輔助），維持12小時(shí)光暗周期。  

    溫度：25-30℃，夏季需注意降溫。  

    通氣：持續(xù)通入過(guò)濾空氣（每秒3-5個(gè)氣泡），避免CO?不足。  

3. 監(jiān)測(cè)與收獲：  

    每日檢測(cè)細(xì)胞密度（可用分光光度計(jì)測(cè)OD值），目標(biāo)濃度10^7 cells/mL。  

    若藻液黏稠度增加，需補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基稀釋。

注意事項(xiàng)：  

 通氣管道需定期消毒，防止生物膜堵塞。  

 避免強(qiáng)光直射，可用遮光布調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。

 3. 三級(jí)擴(kuò)培（大規(guī)模生產(chǎn)）

目標(biāo)：實(shí)現(xiàn)工業(yè)化量產(chǎn)，適用于露天池或生物反應(yīng)器。  

步驟：  

1. 接種：將二級(jí)藻液按10-20%比例接入大型培養(yǎng)系統(tǒng)（如1-2噸的光生物反應(yīng)器）。  

2. 培養(yǎng)條件：  

    光照：自然光+人工補(bǔ)光，總強(qiáng)度5000-10000 lux。  

    溫度：25-30℃，露天池需加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)防高溫。  

    通氣：大功率氣泵持續(xù)供氧，必要時(shí)補(bǔ)充CO?（濃度15%）。  

3. 監(jiān)測(cè)與收獲：  

    每天檢測(cè)pH、溶氧量和營(yíng)養(yǎng)鹽（硝酸鹽、磷酸鹽），及時(shí)補(bǔ)充消耗的營(yíng)養(yǎng)。  

    當(dāng)藻液濃度達(dá)10^7 cells/mL時(shí)，可離心或過(guò)濾采收。

注意事項(xiàng)：  

 露天培養(yǎng)需防雨水、灰塵和蟲(chóng)害，可加裝防蟲(chóng)網(wǎng)。  

 定期清理池壁，防止雜藻附著。

 四、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

1. 藻液發(fā)黃/發(fā)臭：可能是細(xì)菌污染，需丟棄并徹底消毒設(shè)備。  

2. 生長(zhǎng)緩慢：檢查光照是否不足，或營(yíng)養(yǎng)鹽（尤其是氮、磷）是否耗盡。  

3. 沉淀分層：增加通氣量，或補(bǔ)充微量元素（如鐵、鎂）。  

 五、總結(jié)

小球藻培養(yǎng)的成敗取決于無(wú)菌操作、環(huán)境控制和精準(zhǔn)監(jiān)測(cè)。分階段擴(kuò)培既能保證藻種活性，又能逐步適應(yīng)生產(chǎn)條件。無(wú)論是實(shí)驗(yàn)室研究還是商業(yè)開(kāi)發(fā)，遵循科學(xué)的流程和細(xì)節(jié)管理，才能高效獲得優(yōu)質(zhì)藻液。未來(lái)，隨著光生物反應(yīng)器等技術(shù)的進(jìn)步，小球藻的規(guī)?；瘧?yīng)用將更加環(huán)保和經(jīng)濟(jì)！  

小貼士：初次嘗試可從一級(jí)擴(kuò)培開(kāi)始，熟練后再逐步放大，避免資源浪費(fèi)哦！

水產(chǎn)養(yǎng)殖戶(hù)塘口藻種擴(kuò)培都有哪些問(wèn)題？
塘口擴(kuò)培小球藻，第一步：用漂白粉消毒池塘水或自來(lái)水。第二步：加入培養(yǎng)基后用大蘇打中和。第三步：接種，看到淡綠色即可。受到反饋，集中起來(lái)有以下幾個(gè)問(wèn)題：

1、余氯的問(wèn)題：

有過(guò)擴(kuò)培經(jīng)驗(yàn)的養(yǎng)殖戶(hù)打電話(huà)來(lái)問(wèn)：一立方水，100克漂白粉消毒，50克大蘇打中和，會(huì)不會(huì)有余氯？在充氣均勻的情況下，根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)沒(méi)有余氯。如果不放心，可以買(mǎi)一盒“余氯快速分析盒”檢測(cè)一下。大蘇打過(guò)量一點(diǎn)，對(duì)藻類(lèi)生長(zhǎng)沒(méi)有影響。

2、池塘水直接消毒能不能用？井水直接擴(kuò)培可以嗎？

有自來(lái)水當(dāng)然更好，如果池塘上沒(méi)有自來(lái)水，那就只好用池塘水。注意一點(diǎn):池塘水在撒上漂白粉以后，會(huì)有大量死藻等泡沫出現(xiàn)，把表層撈走就可以了。還有人問(wèn)直接用井水不消毒能不能擴(kuò)培？藻類(lèi)擴(kuò)培的無(wú)菌狀態(tài)是關(guān)鍵，井水只是相對(duì)來(lái)說(shuō)菌類(lèi)少，并不是無(wú)菌狀態(tài)。相對(duì)來(lái)說(shuō)，消毒水的時(shí)候，用20-30克漂白粉就可以，10-15克大蘇打中和。井水要充氣暴曬一天使用，加入漂白粉以后，有的井水會(huì)發(fā)紅，中和前，要把底部的鐵銹色絮狀沉淀除掉再使用。

3、培養(yǎng)基的問(wèn)題

有時(shí)我們的養(yǎng)殖棚子上有塑料布會(huì)兜雨水，經(jīng)常會(huì)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)成濃綠色。雨水的污染少，頂棚光線(xiàn)好，空氣中的藻種落進(jìn)去后，沒(méi)有肥，生長(zhǎng)也很旺盛。

4、擴(kuò)培卵囊藻行不行？
除了小球藻，塘口擴(kuò)培別的藻種當(dāng)然可以?，F(xiàn)在卵囊藻比較火，穩(wěn)水周期比小球藻還長(zhǎng)，規(guī)?；囵B(yǎng)、活體濃縮和常溫保存等關(guān)鍵技術(shù)已經(jīng)突破，相關(guān)報(bào)道也很多，我就不多說(shuō)了。不管是小球藻種還是卵囊藻或者硅藻（甚至有廠家打出的復(fù)合藻種），如果我們無(wú)菌下擴(kuò)培不成功，這個(gè)藻種進(jìn)入池塘則很難達(dá)到預(yù)期效果。

5、什么時(shí)候擴(kuò)培藻種？

這個(gè)問(wèn)題比較大?！氨R未動(dòng)，糧草先行”，苗種階段，藻類(lèi)就是糧草，多擴(kuò)培一點(diǎn)，可以作為苗種的天然的開(kāi)口料。但是因?yàn)槲覀兊酿B(yǎng)殖模式和習(xí)慣操作的原因，比如，很多時(shí)候，放苗時(shí)還是一池清水?，F(xiàn)在市面上的肥水產(chǎn)品，不管是無(wú)機(jī)的還是有機(jī)的還是生物肥，都只是培養(yǎng)基而已。就好比我們種莊稼，肥再好也要有種子啊。這個(gè)時(shí)候，加入藻種就很關(guān)鍵。另外，一些地方的養(yǎng)殖戶(hù)喜歡定期消毒殺菌殺藻，或者天氣突變等造成的倒藻后，更是常常為肥水而苦惱。

個(gè)人建議：特別是一些小棚蝦池或高位池，藻相很難穩(wěn)定，可以直接購(gòu)買(mǎi)光語(yǔ)公司的小球藻藻液，濃度高，方便實(shí)惠。